华达转基因工程中心研究成果、在研项目及可销售产品简介
本工程中心经过几年的研究，目前已取得一定的成果，我们可以为业内同仁提供已有的研究成果，也愿意共同合作目前的在研项目。
一、 研究成果
1、动物组织特异性表达系统-------用于制作大规模生产基因制品的动物反应器
1）哺乳动物乳腺特异性表达载体：拥有绵羊乳球蛋白启动子、山羊酪蛋白启动子、小鼠乳腺瘤病毒启动子，以及
相配套的绝缘子序列和核基质结合区序列。
2）鸡输卵管特异性表达载体：拥有鸡卵清白蛋白启动子、溶菌酶启动子、相应的DNase I高敏位点序列和绝缘子序列。
这些载体和序列可以指导外源基因在动物的乳汁或鸡蛋中高表达，以达到大量生产有商业价值的目标基因产品的目的。
2、广谱动物逆转录病毒表达系统：
设计了启动子自失活机制，免除了其感染扩散的危险，使目标基因在适当的启动子控制下表达。广泛适用于所有动物种类，包括脊椎动物和无脊椎动物以及更原始的动物。
3、定点整合CHO细胞表达系统
CHO细胞是一个得到广泛应用的真核基因表达宿主，可以对真核基因产物进行一系列的翻译后修饰，使其获得生物活性和相应的体内半衰期。目前许多真核细胞表达的基因药物是用CHO细胞生产的，如tPA、EPO等 。CHO细胞的规模化培养技术已经形成固定的操作规范，如果在项目的研发阶段采用CHO细胞作为表达宿主，可以为以后的工厂化生产提供有利条件。
表达构件进入细胞后一般随机插入到基因组DNA中，目标基因的表达水平会因不同的插入位点而有极大差异。为了得到一个比较理想的稳定表达细胞株往往需要费时费力的大量筛选工作。我们已经在CHO细胞活跃转录的基因位点引入了重组酶识别序列,构造了HomoCom-CHO细胞.这样用户可以在重组酶的作用下将目的基因高效率地定向导入细胞的活跃转录区，获得均一性表达系统，大大简化筛选过程。
4、诱导型细菌蛋白释放表达载体
载体编码细菌释放蛋白（BRP），该载体与目标表达载体共转化宿主大肠杆菌，在IPTG的诱导下，载体pBRP表达BRP，BRP激活宿主磷脂酶A，磷脂酶A大大增强膜和细胞壁的通透性，目标蛋白无需分泌信号就可以由胞内或周质腔渗漏到培养基中。pBRP提供了氯霉素抗性标记。已经成功地用于许多目标蛋白的表达，分子量从21kD到135kD。
5、稀有密码子问题解决方案
当将来源于真核生物的基因在原核表达时，会因为原核细胞中缺少与真核基因中部分密码子相对应的tRNA而导致翻译效率大大降低甚至终止翻译。这也许就是有人苦恼于一个完美的表达构件却不能得到阳性表达结果的问题的答案。只要将识别这些密码子（通常是6个）的tRNA的基因导入宿主就可以解决这个问题。我们已经获得这些tRNA的基因，并串联在一个表达质粒上，氯霉素抗性，转入了用于基因表达的双蛋白酶突变的BL-21菌株。利用这个表达菌株作为目标基因的受体。可以大大提高真核基因在原核细胞中的表达水平。
6、生长释放因子：
通过给动物注射生长释放因子可以促进动物的生长，提高饲料转化率，提高奶牛的产奶量。美国的孟山都公司对牛使用该产品已经获得FDA的批准，对猪的使用正在审查中。可以提高产奶量20%，可以提高猪的饲料转化率30%，缩短出栏期2个月。生长释放因子是可降解的蛋白质，在食品中没有活性，使用是安全的。在孟山都公司获得FDA的批准后，引起了广泛关注，有许多研究单位从事这方面的研究。我们在前人的基础上，在表达系统的多个环节作了改进，不仅提高了使用效能，降低了成本，而且将产品的使用形式也作了重大改进，使其更适合国情。
7、大规模质粒制备
一般实验室里所用试剂盒只能提取微克级到毫克级的工程质粒，而有些工作对工程质粒有大量的需要，如基因治疗、动物活体试验等。用试剂盒提取小量质粒比较简便，但如果用试剂盒提取克级的质粒，则操作难，造价大。我们开发了从大规模菌体培养到质粒提取纯化的全套工艺系统，可满足提取公斤级质粒的需求。
二、 产品目录
pmMTV ：激素诱导型小鼠乳腺瘤病毒启动子表达载体 ---3000 元
( 可以方便使用的乳腺表达载体 , 尤其在对体外建立的乳腺细胞进行鉴定时易于操作 .)
pIRES ：带内核糖体进入位点，可用于双基因在真核的表达 ---3000 元
( 可以同时表达 2 个非融合型的基因 , 当一个产物需要另一个产物的加工时 , 尤其方便 .)
pCre ：重组酶真核表达载体 ---3000 元 (可以实现LoxP位点之间的同源重组)
pFLP ：重组酶真核表达载体 ---3000 元 (可以实现FRT位点之间的同源重组)
phEF ：高表达看家基因启动子表达载体，带 v5-His 双标签 ---3000 元
( 人的延伸因子启动子 , 可以在动物中普遍使用 , 只要基因所在的细胞有蛋白质的合成 , 这个基因就处于活跃转录状态 )
pYFP-Nuc ：细胞核定位表达增强型黄色荧光蛋白表达载体 ---3000 元
( 细胞质表达的标记信号容易与背景颜色混淆 , 从而产生误判 , 故核定位标记信号更方便实用 .)
pBRP ：诱导型细菌释放蛋白表达载体，可释放胞内产物到培养基 ---5000 元
( 大肠杆菌在细胞壁外还有夹膜 , 即使有信号肽 , 产物也不能进入培养基中 , BRP 可以在细胞壁和夹膜上打孔 , 从而释放产物 )
phGH ：人生长激素基因动物表达载体 ---6000 元
( 采用 genomic DNA, 以人的延伸因子启动子控制 , 可以在动物的几乎所有组织表达 .)
pbGH ：牛生长激素基因动物表达载体 ---6000 元
( 采用 genomic DNA, 以人的延伸因子启动子控制 , 可以在动物的几乎所有组织表达 .)
ppGH ：猪生长激素基因动物表达载体 ---6000 元
( 采用 genomic DNA, 以人的延伸因子启动子控制 , 可以在动物的几乎所有组织表达 .)
phLF ：人乳铁蛋白 cDNA 表达载体 ---7000 元
pgBC ：乳腺特异表达的山羊酪蛋白启动子 , 用于乳腺反应器 ---8000 元
poBLG ：乳腺特异表达的绵羊乳球蛋白启动子 , 用于乳腺反应器 ---8000 元
pOAP ：鸡输卵管特异表达的卵白蛋白启动子，用于转基因鸡反应器 ---8000 元
pRNAi: RNA干扰表达载体 --------------------------2000元
